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在前pcr区建立pcr混合物:
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,pcr实验室改造,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。
⑵如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够---的pcr成分。
⑶作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和pcr前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。
⑷阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在pcr产物的污染,阴性对照应该包括---以外的所有试剂。
⑸当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用很少数量的---。
⑹由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。







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pcr实验室污染的预防与控制
pcr实验室设计的---问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组dna的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪费人力物力。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。


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pcr实验室试剂的操作:
⑴所用的所有溶液都应该没有---和(或)---酶(dnase和rnase)污染。
⑵所有pcr试剂中使用的水都应该是高的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。
⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像---钠一类的抗微生物剂,pcr实验室装修,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的---钠不抑制扩增反应。⑷所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。
⑸所有试剂和样品准备过程中都要使用---灭菌的瓶子和管子。
⑹新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。
⑺样品准备和前pcr区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。


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